> Блог > Новини галузі

Які функції набору ELISA?

2022-12-23

Набір ELISA заснований на твердій фазі антигену або антитіла та ферментному міченні антигену або антитіла. Антиген або антитіло, зв’язане з поверхнею твердого носія, все ще зберігає свою імунологічну активність, а мічений ферментом антиген або антитіло зберігає як свою імунологічну активність, так і активність ферменту. Під час визначення досліджуваний зразок (у якому вимірюється антитіло або антиген) реагує з антигеном або антитілом на поверхні твердого носія. Утворений на твердому носії комплекс антиген-антитіло відокремлюють від інших речовин рідини шляхом промивання.

Додаються мічені ферментом антигени або антитіла, які також зв’язуються з твердим носієм шляхом реакції. У цей час кількість ферменту в твердій фазі пропорційна кількості речовини в зразку. Після додавання субстрату ферментної реакції, субстрат каталізується ферментом, щоб стати кольоровими продуктами. Кількість продукту безпосередньо пов’язана з кількістю досліджуваної речовини в зразку, тому якісний або кількісний аналіз можна проводити відповідно до глибини кольору.

Висока каталітична ефективність ферментів опосередковано підсилює результати імунної відповіді, що робить аналіз високочутливим. ІФА можна використовувати для визначення антигенів, але також можна використовувати для визначення антитіл.

Основні принципи набору ІФА
Він використовує специфічну реакцію антигену та антитіла для з’єднання об’єкта з ферментом, а потім створює кольорову реакцію між ферментом і субстратом для кількісного визначення. Об'єктом вимірювання може бути антитіло або антиген.

У цьому методі визначення необхідні три реагенти:
â Твердофазний антиген або антитіло (імунний адсорбент)
â¡ Мічений ферментом антиген або антитіло (маркер)
â¢ субстрат для ферментативної дії (агент проявлення кольору)

Під час вимірювання антиген (антитіло) спочатку зв’язується з твердим носієм, але все ще зберігає свою імунну активність, а потім додається кон’югат (маркер) антитіла (антигену) і ферменту, який все ще зберігає свою початкову імунну активність і фермент. діяльність. Коли кон'югат реагує з антигеном (антитілом) на твердому носії, додається відповідний субстрат ферменту. Тобто каталітичний гідроліз або ОКИСНО-ВІДНОВНА реакція та колір.

Відтінок кольору, який він виробляє, пропорційний кількості антигену (антитіла), який потрібно виміряти. Цей кольоровий продукт можна спостерігати неозброєним оком, оптичним мікроскопом, електронним мікроскопом, також можна виміряти за допомогою спектрофотометра (прилад для мітки ферменту). Спосіб простий, зручний, швидкий і специфічний.

Попередній:Представлення Elisa Plate

Далі:Чому культура клітин спочатку лізує еритроцити?